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三、讨论
本研究将hdac11基因构建到原核表达载体pGEX-6P-1中，转化入大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达，目的蛋白有表达，但是以包涵体的形式存在。外源基因在大肠杆菌中的高表达常常导致形成无活性的包涵体，目前减少包涵体形成主要有两种策略：① 降低蛋白合成速度比如降低诱导剂浓度和诱导温度[12];②加入促进可溶性表达的生长添加剂[13]。对于已经形成包涵体的蛋白可通过将包涵体蛋白体外复性得到生物活性蛋白。另外本文利用生物信息学软件如ProtParam、ProtScale、SOPMA等对HDAC11的序列，理化性质、二级结构等进行了分析预测。对HDAC11的氨基酸和理化性质分析可知，HDAC11在人、小鼠和食蟹猴中的序列非常保守，而HDAC11与其他家族成员的同源性非常低，相比较而言HDAC11更接近于Ⅰ类HDACs。对HDAC11的二级结构预测后发现无规卷曲和α-螺旋的比例较高，无规卷曲结构比较松散并随环境而改变，常构成酶活性部位和蛋白质特异的功能部位。另外HDAC11可能存在12个磷酸化位点，已有多篇文献报道HDAC1-HDAC10的10个蛋白均含有磷酸化位点，比如HDAC1的S421[14]、HDAC6的S1035[15]、HDAC7的T286[16]、HDAC8的S39[17]等，这些修饰可能会影响酶的活性或蛋白的定位。Ⅱa类HDACs在细胞内的定位主要是由核的输入输出信号和14-3-3蛋白调控，HDAC4、5、7、9含有三个保守的14-3-3结合位点，结合14-3-3后会以一种磷酸化依赖的方式将HDACs留在细胞质中[17]。比如HDAC4的S350被磷酸化后与14-3-3的结合力增强[18]，HDAC5的S259和S498被磷酸化后会促进蛋白从细胞核输出到细胞质[19]，因此对于Ⅱa类HDACs来说磷酸化影响了蛋白的定位。HDAC1的S421和S423被磷酸化后会促进酶活性及与NuRD及SIN3复合物的相互作用[14]，而HDAC8的S39被磷酸化后会降低酶活性[17]，对于HDAC11来说，磷酸化可能影响了它的酶活性。另外HDAC11还含有潜在的SUMO化修饰位点，对于HDACs家族而言，已有文献报道HDAC1、3、4、6和9有SUMO化修饰[20，21]，HDAC1的K444和K476被修饰后酶的活性增强[21]，SUMO化可能也影响了HDAC11的活性。
四、结论
本研究一方面将该基因构建到原核表达载体pGEX-6P-1中进行目的蛋白表达， 结果以包涵体形式表达，另一方面利用生物信息学软件分析了该蛋白的氨基酸序列、理化性质、二级结构、磷酸化位点等，为进一步了解该蛋白的结构与功能以及组蛋白去乙酰化酶家族成员之间的差异打下基础。
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