蚯蚓,我的帅管家中文版,诗领
灵长类动物是现代生物医学研究中重要的实验动物之一。但在人工饲养条件下, 营养状况和寄生虫、皮肤真菌等干扰导致恒河猴和食蟹猴毛发品质出现差异。毛发质量不仅影响外观, 而且能反映实验动物的品质。本文通过对健康的成年恒河猴和食蟹猴毛发中氨基酸和微量元素进行测定分析, 以评估恒河猴和食蟹猴的健康状况。
1、材料和方法
1.1、材料
1.1.1、实验动物:
实验动物来自于云南中科灵长类生物医学重点实验室[SCXK (滇) K2017-0001]饲养的24只5~10岁相同饲养环境条件下的健康恒河猴和食蟹猴。
1.1.2、仪器设备:
日立L-8900高速氨基酸分析仪, 色谱柱 (2622#PH离子交换色谱柱4.5×60mm) , 电感耦合等离子质谱仪 (ICP-MS安捷伦7500ce) , 微波消解仪 (奥地利安东帕Anton Paar MW3000) 。
1.2、方法
1.2.1、动物挑选:
挑选毛色均匀有光泽、体格发育良好且未有体表寄生虫的健康恒河猴 (雄性、雌性各6只) 和食蟹猴 (雄性、雌性各6只) 共24只。
1.2.2、取样:
用毛剪取试验猴头部、背部、四肢被毛, 每只取样品30g, 装入自封袋中送检。
1.2.3、被毛样品处理:
测定氨基酸及微量元素前, 先将收集的被毛充分混匀后用洗洁精清洗, 再用清水漂洗干净, 自然风干, 装样品袋封存待用[1]。
1.2.4、氨基酸含量测定:
取一定质量的样品于20mL水解管中, 加入16mL、6 moL/L的盐酸溶液, 真空脱气30min, 充氮封管, 在110℃下水解22~24h, 取出冷却开管, 用去离子水无损转移到50mL容量瓶中, 并定容。准确取1mL水解液于小瓶中, 于真空中脱酸抽干, 加1 mL水再抽干, 再加1mL水再抽干备用。上机前准确加入1 mL0.02mol/L的盐酸溶液, 充分溶解, 用0.22μm的水相膜滤膜过滤上机分析[2]。
1.2.5、微量元素测定:
(1) 微波前处理方法:准确称取0.1g样品, 置于洗净的聚四氟乙烯 (PTFE) 消解罐中, 加入硝酸4 mL、氢氟酸2 mL、硫酸2mL, 加盖密封, 运行微波消解程序。待消解完成后, 取消解罐置电加热器上, 于200℃缓缓加热至红棕色蒸气挥尽, 并继续浓缩至1~2mL放冷, 将样品转移至干净的聚酯 (PET) 塑料瓶中, 用2%的稀硝酸稀释定重值50.00g。空白对照同法处理。 (2) 微波消解条件:微波消解条件及程序见表1。 (3) ICP-MS工作条件:ICP-MS主要工作条件参数见表2。
表1 微波消解程序 (单位:min)
表2 ICP-MS主要工作参数
1.2.6、分析项目及检测方法:
(1) 用原子吸收分光光度计测定被毛中钙 (Ca) 、铜 (Cu) 、铁 (Fe) 、镁 (Mg) 、锌 (Zn) 含量。 (2) 被毛氨基酸测定项目有天门冬氨酸 (ASP) 、苏氨酸 (THR) 、丝氨酸 (SER) 、谷氨酸 (GLU) 、甘氨酸 (GLY) 、丙氨酸 (ALA) 、胱氨酸 (CYS) 、缬氨酸 (VAL) 、蛋氨酸 (MET) 、异亮氨酸 (ILE) 、亮氨酸 (LEU) 、络氨酸 (TYR) 、苯丙氨酸 (PHE) 、赖氨酸 (LYS) 、氨 (NH3) 、组氨酸 (HIS) 、精氨酸 (ARG) 、脯氨酸 (PRO) 、氨基酸总和 (Total amino-acids) 。氨基酸分析仪的主要色谱条件和技术指标, 进样量为20μL, 反应柱温度为57℃;柱后衍生, 衍生反应温度为135℃, 衍生试剂流速为0.35mL/min, 缓冲液流速为0.4mL/min。
1.3、数据统计分析
所有数据均以“平均值±标准差”表示。P<0.01表示差异极显着, P<0.05表示差异显着, P>0.05表示差异不显着。用SPSS17.0软件进行数据统计分析。
2、结果
2.1、不同性别恒河猴毛发氨基酸和微量元素测定结果
恒河猴被毛中19种氨基酸和5种微量元素测定结果见表3。结果表明, 不同性别恒河猴毛发中19种氨基酸含量和5种微量元素含量均无显着性差异 (P>0.05) 。
表3 不同性别恒河猴、食蟹猴毛发氨基酸和微量元素测定 (单位:%、mg/kg)
2.2、不同性别食蟹猴毛发氨基酸和微量元素测定结果
食蟹猴被毛中19种氨基酸和5种微量元素测定结果见表3。结果表明, 不同性别食蟹猴毛发中19种氨基酸含量和5种微量元素含量均无显着性差异 (P>0.05) 。
2.3、恒河猴与食蟹猴被毛平均氨基酸和微量元素测定结果比较分析
恒河猴与食蟹猴被毛平均氨基酸和微量元素测定结果比较分析见表4。结果表明, 被毛氨基酸中的丙氨酸 (ALA) 含量食蟹猴组显着高于恒河猴组 (P<0.05) , 异亮氨酸 (ILE) 含量恒河猴组极显着高于食蟹猴组 (P<0.01) , 亮氨酸 (LEU) 含量恒河猴组显着高于食蟹猴组 (P<0.05) ;被毛中其余氨基酸含量两组间均无显着性差异 (P>0.05) 。被毛微量元素中铜的含量, 食蟹猴组显着高于恒河猴组 (P<0.05) 。恒河猴组和食蟹猴组被毛中其余微量元素钙、铁、镁、锌含量均无显着性差异 (P>0.05) 。
表4 恒河猴与食蟹猴被毛平均氨基酸和微量元素比较 (单位:%、mg/kg)
3、讨论
12只恒河猴和12只食蟹猴均为人工饲养实验猴, 被毛有光泽、营养状况良好、体表无寄生虫等疾病, 影响被毛中氨基酸及微量元素测定的因素较少, 因此本文不同性别恒河猴及不同性别食蟹猴毛发氨基酸和微量元素测定结果可作为正常值参考。从表3可以看出, 同一品种、不同性别的人工饲养实验猴毛发中的19种氨基酸及5种微量元素含量无显着性差异。从表3、表4可以看出, 人工饲养环境条件下的恒河猴和食蟹猴被毛中, 谷氨酸和胱氨酸的含量最高, 蛋氨酸的含量最低。而由于采用酸水解被毛角蛋白方法进行处理, 色氨酸被破坏不能进行测定, 水解过程中对氨基酸的破坏主要以色氨酸为主, 所以色氨酸的含量将以氨的形式大概得以体现[3]。在被毛微量元素的测定中, 钙的含量最高, 能达到铜元素的100倍以上。本文测定的毛发中微量元素钙、铜、铁、镁、锌与马昭林等测定的健康恒河猴毛发中的微量元素钙、铜、铁、镁、锌相比, 钙、铜、镁测定值差异不大, 而铁、锌含量的测定值差异较大, 这可能与个体差异、环境、饲养条件、品种等有关。但是就群体平均含量而言, 仍存在着一定的规律性, 可为恒河猴和食蟹猴毛发氨基酸和微量元素的正常值提供参考。
本文恒河猴、食蟹猴毛发氨基酸和微量元素测定值, 为实验猴被毛氨基酸和微量元素组成数据库的建立及其配比筛选提供了参考数据, 为提高实验猴被毛品质和实验动物质量提供了指导, 以不断完善实验恒河猴、食蟹猴营养学有关氨基酸和微量元素的基础数据。
参考文献
[1]鲁帅尧, 和占龙, 禹文海, 等.猕猴被毛氨基酸含量的初步研究[J].四川动物, 2009, 28 (2) :189-192.
[2]左然涛, 吕德亮, 吴反修, 等.饲料中二十碳四烯酸 (ARA) 对刺参成参生长和营养组成的影响[J].饲料工业, 2017, 38 (6) :30-34.
[3]鲁帅尧, 和占龙, 陈丽雄, 等.猕猴脱毛的营养学因素分析[J].中国比较医学杂志, 2011, 21 (7) :33-38.